Gélose chocolat : Principes Compositions, utilisations des préparations et caractéristiques des colonies
L’agar au chocolat (CHOC) ou l’agar au chocolat et au sang (CBA) est un milieu de croissance enrichi et non sélectif utilisé pour l’isolement des bactéries pathogènes. C’est une variante de la plaque de gélose au sang, contenant des globules rouges qui ont été lysés par un chauffage lent à 80 °C donnant au milieu une couleur brun chocolat, raison pour laquelle il est appelé gélose au chocolat.
Quel est le principe de l'agar au chocolat
L’agar CHOC est utilisé pour la culture de bactéries respiratoires exigeantes comme Haemophilus influenzae et Neisseria meningitidis et les gonorrhées qu’aucune de ces espèces n’est capable de cultiver sur de l’agar de sang de mouton.
En outre, certaines de ces bactéries, notamment H. influenzae, ont besoin de facteurs de croissance spécifiques tels que le NAD (facteur V) et l’hémine (facteur X), qui se trouvent à l’intérieur des globules rouges ; ainsi, une condition préalable à la croissance de ces bactéries est la lyse des globules rouges. La chaleur inactive également les enzymes qui pourraient autrement dégrader le NAD. L’agar est nommé d’après la couleur et ne contient pas de chocolat.
Notez que la composition de l’agar au chocolat et de l’agar au sang est la même mais que la seule différence est que lors de la préparation de l’agar au chocolat, les globules rouges sont lysés par un chauffage doux.
Quels sont les microorganismes qui peuvent être cultivés sur de l'agar au chocolat
1. Haemophilus influenzae
2. Neisseria gonorrheae
3. Neisseria meningitidis
Quelle est la composition de l'agar au chocolat ?
La composition du CHOC est la même que celle de la gélose au sang, c’est-à-dire
Ingrédients Gms / Litre
Protéine peptone 20.000
Dextrose 0,500
Chlorure de sodium 5.000
Phosphate disodique 5.000
Agar 15.000
pH final ( à 25°C) 7,3±0,2
Comment l'agar au chocolat est-il préparé ?
- L’analyse thermique d’un volume de sang de cheval ou de mouton représentant 5 % du volume total des milieux préparés est effectuée très lentement à 56 °C dans un bain-marie (certaines personnes utilisent du sang humain et obtiennent toujours le même résultat).
- Distribuer 20 ml dans des boîtes de Pétri de 15×100 mm. Laissez le milieu se solidifier et la condensation sécher.
- Placer les plaques dans des sacs en plastique stériles et les conserver à une température inférieure à 30°C dans un récipient hermétiquement fermé et un milieu préparé à 2-8°C. jusqu’à l’utilisation.
- Comme test de stérilité ou contrôle de qualité, incuber une plaque non inoculée pendant 48 heures à 35-37°C avec ~5% de CO2 (ou dans un bocal à bougie).
- Une autre méthode est : La gélose au sang est mise dans un bain-marie pendant environ 1 heure jusqu’à ce que sa couleur passe du rouge au brun chocolat. Le chauffage transforme l’hémoglobine en hématine.
Quelle est la couleur de l'Agar au chocolat : Couleur opaque du chocolat
uninoculate chocolate agar (Opaque chocolate color
Quelles sont les caractéristiques de la colonie dans l'agar au chocolat
– Neisseria meningitidis : la croissance sur gélose au chocolat est grisâtre, non hémolytique, ronde, convexe, lisse, humide, des colonies brillantes avec un bord clairement défini.
Haemophilus Influenzae in chocolate agar
Haemophilus Influenzae dans l’agar au chocolat
– Neisseria gonorrhoeae : les colonies sur gélose au chocolat sont brun-rose et translucides, présentent une consistance lisse et des marges définies, et ont généralement un diamètre de 0,5 à 1 mm.
– Haemophilus influenzae : Colonies non hémolytiques, opaques, de couleur crème à gris (la gélose au sang de mouton qui les accompagne ne montre aucune croissance)
Quelles sont les autres modifications de l'agar au chocolat :
Gélose Thayer-Martin : elle est utilisée pour l’isolement sélectif de N. gonorrhoeae et N. meningitidis. Thayer-Martin Media est une gélose au chocolat enrichie en vancomycine (3,0 mg/l), colistine (7,5 mg/l) et nystatine (1250 unités/l). Elle inhibe la flore normale, y compris les Neisseria non pathogènes.
Agar au chocolat avec bacitracine : La PAC avec bacitracine est un milieu sélectif utilisé pour améliorer l’isolement primaire de H. influenzae à partir d’échantillons contenant une flore mixte de bactéries et/ou de champignons.
Agar au chocolat avec base GC et supplément de croissance : C’est un milieu qui répond aux exigences particulières de croissance (hémine et NAD) nécessaires à l’isolement d’organismes exigeants, tels que H. influenzae. Lorsqu’il est incubé à 35-37°C dans une atmosphère à 5% de CO2, il est composé de 2% d’hémoglobine et d’enrichissements en coenzyme.
Agar au chocolat avec TSA et compléments de croissance : Il s’agit d’un milieu qui répond aux exigences particulières de croissance (hémine et NAD) nécessaires à l’isolement d’organismes exigeants, tels que H. influenzae, lorsqu’il est incubé à 35-37°C dans une atmosphère à 5% de CO2.