Les différents types de cristaux urinaires et leurs importances cliniques
Le bleu de méthylène éosine (EMB, également connu sous le nom de “formulation de Levine”) est un milieu de culture sélectif et différentiel pour les bactéries gram-négatives. Il contient des colorants qui sont toxiques pour les bactéries gram-positives, ce qui le rend sélectif. L’EMB est le milieu sélectif et différentiel pour les coliformes. Il est composé de deux colorants, l’éosine et le bleu de méthylène dans le rapport 6:1.
Une application courante de cette coloration est dans la préparation de l’agar EMB, un milieu microbiologique différentiel, qui inhibe légèrement la croissance des bactéries Gram-positives et fournit un indicateur coloré permettant de distinguer les organismes qui fermentent le lactose (par exemple, E. coli) de ceux qui ne le font pas (par exemple, Salmonella, Shigella). Les organismes qui fermentent le lactose présentent des “colonies nucléées”, c’est-à-dire des colonies dont le centre est sombre.
dans les laboratoires médicaux, ce milieu est important car il permet de distinguer les microbes pathogènes dans un court laps de temps.
Il est sélectif car il encourage la croissance de certaines bactéries tout en en inhibant d’autres. L’éosine Y et le bleu de méthylène inhibent généralement la croissance des bactéries à Gram positif (quelques-unes se développeront) et permettent généralement la croissance des organismes à Gram négatif (certains ne se développeront pas).
- En cas de bonne croissance, on a généralement une bactérie Gram négative.
- Si la croissance est nulle ou faible, vous avez très probablement une bactérie Gram positive.
PRINCIPE DE L'EMB
La fermentation rapide du lactose par ces bactéries produit des acides, qui abaissent le pH. Cela favorise l’absorption de colorants par les colonies, qui sont maintenant colorées en noir et violet.
Les non-fermenteurs de lactose peuvent augmenter le pH par désamination des protéines. Cela permet de s’assurer que le colorant n’est pas absorbé. Les colonies seront incolores.
Sur l’EMB, si E. coli est cultivé, il donnera un reflet vert métallique distinctif (en raison des propriétés métachromatiques des colorants, du mouvement d’E. coli utilisant des flagelles et des produits finaux de fermentation fortement acides). Certaines espèces de Citrobacter et d’Enterobacter réagiront également de cette manière à l’EMB. Ce milieu a été spécialement conçu pour décourager la croissance des bactéries à Gram positif, c’est pourquoi l’EMB est très différencié et peut être utilisé comme substitut à la gélose MacConket.
Objectif : sélectionner et isoler les organismes à Gram négatif, sélectionner et isoler les coliformes, et différencier la famille des Enterobacteriaceae. Elle sert principalement à isoler les coliformes fécaux et à détecter les contaminations fécales. La sélection Gram négatif et la détection des coliformes sont toutes deux imparfaites, un petit pourcentage de souches n’agissant pas comme prévu.
Lire également :
MacConkey Agar : Principles, Composition, Preparation, uses and colony characteristics
L'EMB contient les ingrédients suivants Composition
1. Digestion enzymatique de la gélatine
2. Lactose : Sucre, aide à différencier le fermenteur de lactose du fermenteur de non lactose
3. Phosphate dipotassique
4. Eosin Y : Indicateur
5. Bleu de méthylène : indicateur de pH
6. Agar
Procédure :
1. Étiqueter correctement vos plaques. Marquez le fond de l’assiette en tiers et indiquez les espèces qui seront présentes dans chaque section. Il est préférable d’étiqueter le côté de la plaque du fond ou d’écrire sur le fond en minuscules lettres afin de pouvoir observer clairement la croissance.
2. Si possible, inoculez un tiers de votre strie inconnue pour les colonies isolées. Les colonies isolées fonctionnent mieux pour ce test, mais ce n’est pas indispensable.
3. Inoculez un tiers avec E. coli, et l’autre tiers avec S. epidermidis. En général, il est préférable de tenir E. coli à l’écart des autres cultures car il peut les surpasser. (N’ensemencer qu’une seule espèce/un tiers, ne pas mélanger les bactéries ! Voir plus loin pour savoir comment procéder rapidement).
4. Vous voudrez comparer la croissance sur ces plaques à la croissance inoculée sur un milieu à usage général comme NA. ou TSA.
5. Incubez vos plaques à l’envers dans l’incubateur à 35-37 C pendant 1-2 jours. Si possible, examinez les plaques à 1 et 2 jours.
6. Les espèces à croissance lente peuvent nécessiter un ou deux jours de croissance supplémentaire.
Résultats
1. Comparez votre croissance sur ces plaques à la croissance sur un support à usage général. (Si aucune croissance sur le support à usage général, jetez vos résultats et recommencez le test). Recherchez la présence ou l’absence de croissance, et s’il y a une croissance si elle est réduite par rapport à la normale.
2. S’il y a une excroissance, vérifiez la couleur de l’excroissance. La croissance est-elle essentiellement incolore, rose vif, violacée ou verdâtre avec un reflet métallique ? Pour obtenir vos résultats, utilisez les zones de couleur la plus foncée qui peuvent se trouver uniquement au centre des colonies.
3. On prédit que si un organisme se développe bien sur la gélose EMB, il est très probablement Gram négatif, sinon il est très probablement Gram positif. Et si la croissance est bonne et rose ou plus sombre, il est très probablement coliforme, sinon il est probablement non coliforme. Si les colonies sont plus foncées que roses (violacées, verdâtres avec un reflet métallique, ou même noirâtres), les organismes utilisent beaucoup les sucres lactose/saccharose et ont fortement abaissé le pH.
Différenciation des bacilles à Gram négatif sur la base de la croissance des colonies sur l'EMB AGAR
Cultiver sur de l’agar EMB
· Ces plaques différencient les espèces et leur capacité à abaisser le pH.
· Si la croissance est incolore, blanc cassé ou d’un rose très clair et terne, le pH n’a pas été affecté dans une large mesure : il s’agit probablement d’un noncoliforme Gram négatif.
· Si la croissance est bonne et rose, l’utilisation de sucre a légèrement fait baisser le pH : il s’agit probablement d’un coliforme Gram négatif.
· Si une bonne croissance est violette ou a un centre violet, l’utilisation du sucre a fait baisser le pH : il s’agit probablement d’un coliforme Gram négatif.
· Si la croissance est bonne avec un reflet métallique verdâtre, la forte utilisation du sucre a considérablement réduit le pH : il s’agit probablement d’un coliforme Gram négatif.
· (Si la croissance est faible ou nulle, rappelez-vous qu’il s’agit probablement d’un organisme à Gram positif.
Contrôle de qualité
Afin de confirmer les conclusions provisoires de ce milieu de culture, il faut procéder à une coloration de Gram et à des tests d’utilisation du lactose et du saccharose. D’autres espèces de bactéries peuvent être utilisées comme témoins positifs et négatifs.
– E. coli aura une bonne croissance violacée ou verdâtre ou noirâtre (avec ou sans reflet métallique),
– Enter bacter aérogènes aura une bonne croissance rose ou violacée,
– L’épiderme du S. se développera mal, voire pas du tout.
Et oui, la même espèce peut produire des couleurs différentes selon l’importance du changement de pH.
La gélose EMB n’est que modérément inhibitive pour de nombreux Gram positifs et levures, tandis que certaines souches de Salmonella et Shigella peuvent ne pas bien se développer.
Le reflet métallique verdâtre n’apparaît pas toujours sur les souches qui le produisent.
La stérilisation de ce milieu réduit le bleu de méthylène et crée un précipité qui peut être ré-oxydé et dispersé respectivement en mélangeant les milieux.