Milieux de culture MacConkey : Principes Compositions, utilisations des préparations et caractéristiques des colonies
Le milieu de culture MacConkey agar a été développé au 20ème siècle par Alfred Theodore MacConkey. La gélose MacConkey a été le premier milieu différentiel solide formulé, mais elle est maintenant connue comme un milieu de culture sélectif et différentiel couramment utilisé pour l’isolement des bactéries Gram-négatives entériques.
La présence de Crystal violet et de sels biliaires incorporés dans l’agar MacConkey aide à inhiber la croissance des bactéries Gram-positives, ce qui en fait un milieu sélectif, et des bactéries Gram-négatives exigeantes, telles que Neisseria et Pasteurella. Les bactéries entériques à Gram négatif peuvent tolérer les sels biliaires en raison de leur membrane externe résistante à la bile.
La gélose MacConkey est sélective pour les organismes Gram négatif, et différencie les bâtonnets Gram négatif fermentant le lactose des bâtonnets Gram négatif ne fermentant pas le lactose. Il est principalement utilisé pour la détection et l’isolement des bactéries membres de la famille des entérobactéries et des Pseudomonas spp.
L’agar MacConkey est utilisé pour l’isolement sélectif et l’identification des entérobactéries à partir d’échantillons tels que les matières fécales, l’urine, les eaux usées et les aliments.
Principle of selective and differential ability of MacConkey agar
Les bactéries entériques Gram-négatives qui se développent sur l’agar MacConkey se différencient par leur capacité à fermenter le lactose (sucre). La fermentation du lactose par les bactéries conduit à la production de l’acide qui fait baisser le pH du milieu. La baisse du pH est indiquée par le changement de l’indicateur rouge neutre en rose (l’indicateur neutre apparaît rose lorsque le pH est inférieur à 6,8).
Les bactéries qui fermentent fortement le lactose produisent suffisamment d’acide pour provoquer la précipitation des sels biliaires autour de la croissance. Il apparaît sous la forme d’un halo rose entourant des colonies individuelles ou des zones de croissance confluentes. Un halo rose n’est pas visible autour des colonies de bactéries plus faibles fermentant le lactose.
En ce qui concerne la capacité de sélection de MacConkey agr,les bactéries Gram-négatives qui se développent sur l’agar MacConkey mais qui ne fermentent pas le lactose apparaissent incolores sur le milieu et l’agar entourant les bactéries reste relativement transparent.
Composition de la gélose MacConeky et ses fonctions :
– Digestion enzymatique de la gélatine, de la caséine et des tissus animaux : fournit de l’azote, des vitamines, des minéraux et des acides aminés essentiels à la croissance.
– Lactose : hydrate de carbone fermentable fournissant du carbone et de l’énergie.
– Sels biliaires : agents sélectifs et inhibiteurs des organismes à Gram positif.
– Violet cristal : Les bactéries à Gram positif sont généralement inhibées par le cristal violet.
– Chlorure de sodium : fournit des électrolytes essentiels pour le transport et l’équilibre osmotique.
– Rouge neutre : indicateur de pH. qui est de couleur rouge lorsque le pH est inférieur à 6,8.
– Suite à la fermentation du lactose, le pH du milieu diminue, changeant la couleur du rouge neutre au rose
– Agar : Agent de solidification
Comment préparer l'agar MacConkey
– Selon les instructions du fabricant, Suspendre la quantité mesurée de poudre (voir dans la bouteille de gélose et généralement 50 grammes) dans 1 L d’eau distillée et mélanger soigneusement.
– Chauffer en agitant constamment et faire bouillir pendant 1 minute pour dissoudre complètement la poudre.
– Autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
L'apparition des colonies sur l'agar MacConkey
– Les organismes fermentant le lactose apparaissent sous forme de colonies roses à rouge brique avec ou sans zone de bile précipitée.
– Les organismes fermentant sans lactose apparaissent en colonies incolores ou claires
Identification of lactose fermenters and non lactose fermenters MacConkey Agar
Organismes de fermentation du lactose tels que vus sur l'agar MacConkey :
– Citrobacter spp. : les colonies sont rose clair après 48 heures.
– Klebsiella spp. : Colonies de fermenteurs de lactose mucoïde
– Escherichia coli : Fermenteur de lactose ; colonies plates, sèches et roses entourées d’une zone rose plus foncée de sels biliaires précipités.
– Serratia spp : Fermenteur de lactose tardif ; S. marcescens peut être pigmenté en rouge, surtout si la plaque est laissée à 25°C
Organismes fermenteurs sans lactose vus sur la gélose MacConkey
– Proteus spp. : peuvent essaimer en fonction de la quantité de gélose dans le milieu ; se caractérisent par une odeur fétide
– Shigella spp. : Shigella sonnei produit des colonies plates aux bords déchiquetés.
– Yersinia spp. : peut être incolore à la pêche.
– Salmonella spp. : Pas une fermentation du lactose
– D’autres organismes présentant des colonies incolores sur la gélose MacConkey sont : Edwardsiella spp, Hafnia spp, Morganella spp, Providencia spp.
Quant aux bactéries gram positives comme Staphylococcus aureus, aucune croissance n’est observée